· poliakrilamidJel, akrilamid monomeri, polimerizasyon başlangıç maddesi, katalizör ve tuz ve tampon karışımının bir araya gelmesiyle oluşur.
· akrilamidve BIS (N, N'- metilen çift akrilamid) monomer formdaki jel matrisidir.
· amonyum persülfat yapıştırıcı polimerizasyon sürecini başlatır. Tutkalın formülasyonu suda hazırlanmış %10 amonyum persülfat çözeltisi gerektirir. Bilgilerin çoğu aktif kullanım ihtiyacını belirtmiştir. Ancak, %10'luk çözelti önemli bir aktivite kaybı olmadan birkaç hafta boyunca 4℃'de tutulabilir. 10 ml'ye kadar hazırlayın ve tutkal topaklanmadığında atın.
İpucu: Yüzdesiakrilamiddizilemede tutkal ve protein tutkalı aynı değildir. Önceden hazırlanmış akrilamid: BIS solüsyonu kullanıyorsanız, doğru şişeyi aldığınızdan emin olun.
· TEMED (N, N, N ', N '- tetrametil etilendiamin) bir katalizördür, kahverengi bir şişede buzdolabına konur. Tutkal dökmeden hemen önce eklenir.
· Poliakrilamid elektroforezinde kullanılan cam elektroforezden önce ve sonra her defasında yıkanmalıdır. Elektroforezden sonra, yumuşak bir fırça ve bezle sıcak sabunlu suda yıkayın, damıtılmış suyla durulayın ve kurumaya bırakın.
· nem ve toz içi boş polimere neden olabilir. Elektroforezden önce cam plakayı cam temizleyiciyle temizleyin ve yumuşak bir fırçayla silin. Damıtılmış suyla yıkayın ve kağıt mendille iyice kurulayın. Kağıtla silmeden önce %70 etanol ile durulamak temizlemeye ve kurumayı hızlandırmaya yardımcı olur. Akrilamid örneklerini sırayla ekleyin: BIS, su, tampon çözeltisi, amonyum persülfat, TEMED. İyi çalkalayın ve hemen dökün.
Polimerizasyondan önce poliakrilamidin gazının alınması gerekli değildir. (Akrilamid, oksijenin polimerizasyonu engellemesi nedeniyle kabarcıkları gidermek için vakuma yerleştirilirdi.)
Yatay yapıştırıcı noktası örnek ipuçları.
· Alttaki kutuya siyah bir kağıt parçası koyun, daha net görebilmek için siyah arka planlı örnek bir delik açın.
· Tutkal tankı dolu tampon, kolloidin hemen üzerinde.
· kenarda ışık varsa ışıkları açın, ışığın kolloidal olarak parlamasına izin verin. Numuneyi pipete çekin.
· Otomatik pipetleme cihazı kullanılarak.
· 10-200 mu 1 sıvı hareketli nokta numunedeki noktaların çoğunda kullanılabilir. Çok küçük numune delikleri (10μ1'den az) için, dizileme tutkalı için kullanılan uzun pipet başlığı daha uygundur.
· Numuneye yeni daldırılmış pipetleme, yavaşça hareket eden sıvıyı soluma. Numune gliserinle yapışkan görünebilir ve hızlı pompalama hava kabarcıklarını pipet başlığına çekebilir.
· Örnekleri soluduktan sonra pipetleme başlığı, sıvı başlığını borunun kenarına hafifçe hareket ettirecek veya kağıt silme sıvı başlığını damlacıkların dışına çekecektir. Örneği emmemeye dikkat edin.
Örneği numune deliğine yerleştirin
· Pipetleme cihazını az miktarda basınç altında tutarak, numunelerin hafifçe taşan sıvı başlığına hareket etmesini sağlayın.
· Pipetleme başlığı tampona, nokta deliklerinden biraz daha yüksek olacak şekilde yerleştirildiğinde pozitif basınç korunur. Pipetin ucu küçük bir deliğe yerleştirilebilir.
· örnekleri yavaşça ve istikrarlı bir şekilde dışarı çıkarın. Pipet ucu nokta örnek deliğinin üstüne yerleştirilir ve örnek deliğe batar. Örneğin içeri itmek yerine örnek deliğini doldurmasına izin verin.
· Sıvı başlıklı numunenin son damlası düştüğünde, sıvı ikinci bacağa hareket edecek, sıvı yavaşça yükselecek ve tampondan dışarı çıkacaktır.
Dikey tutkal örneklemesi nasıl yapılır?
· Dikey tutkal noktası iki cam parçası arasında oluşan örnek delikleri. Çok ince tutkalda, pipet başlığı iki cam levha arasına bile sokulamaz. Gliserini izleyin! Pipet başlığını örnek deliğinin üzerine koyun ve örnek deliğe batacaktır.
· Nokta numunesi almadan önce, polipropilen asil jel numune deliğinin dikey noktasının temiz durulandığından emin olun. Polimerize olmamış akrilamidi ve numune deliğinin dibinde görünebilecek suyu yıkayın. Su, numune deliğini önemli ölçüde küçültebilir. 25 ml veya 50 ml'lik bir şırınga ve 18 ölçülü bir iğne kullanın. Elektroforez tamponunu dökün ve numune deliğini dikkatlice yıkayın.
· Örnek deliğini görmek zor olabilir, ancak aynı zamanda geri kalanı kolaydır. Fazla delik varsa, örnek tamponu bromofenol mavisi ile test edilebilir.
Gönderi zamanı: Mar-31-2023