· poliakrilamidjel, akrilamid monomeri, polimerizasyon başlangıç malzemesi, katalizör ve tuz ve tampon karışımının bir arada olmasıyla oluşur.
· akrilamidve BIS (N,N'-metilen çift akrilamid), jel matrisi oluşturan monomerdir.
· amonyum persülfat yapışkan polimerizasyon sürecini başlatır. Tutkalın formülasyonu, su içinde hazırlanan %10 amonyum persülfat çözeltisini gerektirir. Bilgilerin çoğu aktif kullanıma ihtiyaç duyulduğunu gösteriyordu. Bununla birlikte, %10'luk çözelti, önemli bir aktivite kaybı olmadan birkaç hafta boyunca 4°C'ye yerleştirilebilir. 10 ml'ye kadar hazırlayın ve tutkal toplanamadığında atın.
İpucu: Yüzdesiakrilamidtutkal ve protein tutkalının sıralanması aynı değildir. Hazır akrilamid: BIS solüsyonu kullanıyorsanız doğru şişeyi aldığınızdan emin olun.
· TEMED (N, N, N', N'-tetrametil etilendiamin), kahverengi şişede, buzdolabına konulan bir katalizördür. Tutkal dökmeden hemen önce ekleyin.
· Poliakrilamid elektroforezde kullanılan camlar elektroforezden önce ve sonra her defasında yıkanmalıdır. Elektroforezden sonra yumuşak bir fırça ve bezle sıcak sabunlu su ile yıkayın, distile su ile durulayın ve kurumaya bırakın.
· içi boş polimer nedeniyle nem ve toz oluşabilir. Elektroforezden önce cam plakayı cam temizleyici ile temizleyin ve yumuşak bir fırça ile silin. Damıtılmış suyla yıkayın ve kağıt mendille iyice kurulayın. Kağıtla silmeden önce %70 etanol ile durulamak temizlemeye ve kurumayı hızlandırmaya yardımcı olur. Akrilamid örneklerini art arda ekleyin: BIS, su, tampon çözeltisi, amonyum persülfat, TEMED. İyice çalkalayın ve hemen dökün.
Poliakrilamidin polimerizasyondan önce gazının alınması gerekli değildir. (Akrilamid, oksijenin polimerizasyonu engellemesi nedeniyle kabarcıkları gidermek için vakuma yerleştirilirdi.)
Yatay tutkal noktası örnek uçları.
· Alt kutuya bir parça siyah kağıt koyun, daha net görebilmek için bazı örnek delik açmak için siyah arka plan.
· tutkal tankı dolu tampon, kolloidin hemen üzerinde.
· kenarda ışık varsa ışıkları açın, ışık kolloid parlasın. Numuneyi pipete çekin.
· Otomatik pipetleme cihazının kullanılması.
· 10-200 mu'da 1 sıvı hareket noktası numunenin çoğu noktasında kullanılabilir. Çok küçük numune delikleri için (10μ1'den az), yapıştırıcıyı sıralamak için kullanılan uzun pipet kafası daha uygundur.
· Pipetleme numuneye yeni daldırılarak yavaş hareket eden sıvının solunması. Numune gliserin nedeniyle yapışkan görünebilir ve hızlı pompalama pipet kafasına hava kabarcıkları çekebilir.
· Pipetleme başlığını soluduktan sonra numuneler, sıvı başlığını yavaşça borunun kenarına doğru hareket ettirecek veya silme kağıdı, sıvı başlığını damlacıkların dışına doğru emecektir. Numuneyi emmemeye dikkat edin.
Numuneyi numune deliğine yerleştirin
· Biraz basınç tutmak için pipetleme cihazı, numunelerin sıvı kafasının taşmasını hafifçe hareket ettirmesini sağlar.
· Tamponun içine yerleştirilen pipetleme kafası, nokta deliklerinden biraz daha yüksekte olup, pozitif basıncı korur. Pipetin ucu küçük bir deliğe yerleştirilebilir.
· numuneleri yavaşça ve istikrarlı bir şekilde çıkarın. Pipet ucu, nokta numune deliğinin üzerine yerleştirilir ve numune, deliğin içine batar. Numunenin içeri itmek yerine numune deliğini doldurmasına izin verin.
· Sıvı başlıklı numunenin son damlası düştüğünde, sıvı ikinci ayağa hareket edecek, sıvı yavaşça yükselecek, tamponun dışına çıkacak
Dikey tutkal numunesi nasıl yapılır?
· İki cam parçası arasında oluşturulan dikey yapıştırma noktası numune delikleri. Çok ince tutkalda pipet başlığı iki cam plaka arasına bile yerleştirilemez. Gliserine dikkat edin! Pipet kafasını numune deliğinin üzerine koyun; numune deliğe batacaktır.
· Numuneyi önce noktaya koyun, polipropilen asil jel numune deliğinin dikey noktasını durulayıp temiz bir şekilde koyduğunuzdan emin olun. Polimerize olmayan akrilamidi ve numune deliğinin dibinde görünebilecek suyu yıkayın. Su, numune deliğini önemli ölçüde küçültebilir. 25 ml veya 50 ml'lik bir şırınga ve 18 gauge iğne kullanın. Elektroforez tamponunu dökün ve numune deliğini dikkatlice yıkayın.
· Numune deliğini görmek zor olabilir ama aynı zamanda gerisi kolaydır. Fazla delik varsa numune tamponu bromofenol mavisi ile test edilebilir.
Gönderim zamanı: Mar-31-2023