· poliakrilamidJel, akrilamid monomer, polimerizasyon başlangıç malzemesi, katalizör ve tuz ve tampon karışımının birlikte olmalıdır.
· akrilamidve bis (n, n '- metilen çift akrilamid) monomer form jel matrisidir.
· Amonyum persülfat başlatma yapışkan polimerizasyon işlemi. Tutkalın formülasyonu, suda hazırlanan% 10 amonyum persülfat çözeltisi gerektirir. Bilgilerin çoğu aktif kullanım ihtiyacını gösterdi. Bununla birlikte,% 10 çözelti, önemli aktivite kaybı olmadan birkaç hafta boyunca 4 ℃ 'ye yerleştirilebilir. 10 ml'ye kadar yapın ve yapıştırıcı toplanmadığında atın.
İpucu: yüzdesiakrilamidDizilemede tutkal ve protein tutkalı aynı değildir. Önceden yapılmış akrilamid kullanıyorsanız: BIS çözeltisi, doğru şişeyi aldığınızdan emin olun.
· Temel (n, n, n ', n'- tetrametil etilendiamin), buzdolabına yerleştirilmiş kahverengi bir şişede bir katalizördür. Tutkal dökmeden hemen önce ekleyin.
· Elektroforezde kullanılan cam elektroforez her seferinde ve sonra yıkanmalıdır. Elektroforezden sonra, yumuşak bir fırça ile yıkayın ve sıcak sabunlu suda bezle yıkayın, damıtılmış su ile durulayın ve kurumaya devam edin.
· Nem ve toz içi boş polimer ile neden olabilir. Elektroforezden önce cam plakayı cam temizleyici ile temizleyin ve yumuşak bir fırça ile silin. Damıtılmış su ile yıkayın ve bir kağıt silme ile iyice kurutun. Kağıtla silinmeden önce% 70 etanol ile durulama, kurutmayı temizlemeye ve hızlandırmaya yardımcı olur. Art arda akrilamid örneklerini ekleyin: bis, su, tampon çözeltisi, amonyum persülfat, temalı. İyice sallayın ve hemen dökün.
Polimerizasyondan önce poliakrilamidin çözülmesi gerekli değildir. (Oksijen polimerizasyonu inhibe ettiği için baloncukları çıkarmak için akrilamid bir boşluğa yerleştirilirdi.)
Yatay tutkal noktası numune ipuçları.
· Daha net görmek için bazı örnek delikler yapmak için alt kutuya bir parça siyah kağıt, siyah arka plan koyun.
· Kolloidin hemen üzerinde tutkal tankı dolu tampon.
· Kenarın ışığı varsa, ışıkları açın, ışık kolloid parlatın. Numuneyi pipete çizin.
· Otomatik pipetleme cihazını kullanma.
· 10-200 Mu 1'de Sıvı hareket noktası numunedeki noktaların çoğunda kullanılabilir. Çok küçük numune delikleri için (10μ1'den az), tutkal dizilimi için kullanılan uzun pipet başlığı daha uygundur.
· Pipetleme sadece numuneye daldırılmış, yavaşça hareket eden sıvıyı soluyarak. Numune gliserin ile yapışkan görünebilir ve hızlı pompalama pipet kafasına hava kabarcıkları çekebilir.
· Pipetleme kafasını soluduktan sonra numuneler, sıvı kafasını hafifçe borunun kenarında hareket ettirir veya kağıt silme kağıdı damlacıkların dışındaki sıvı kafasını emer. Örneği emmemeye dikkat edin.
Numuneyi numune deliğine yerleştirin
· Pipetleme Cihazı Biraz basınç tutmak için, numunelerin taşma sıvı kafasını hafifçe hareket ettirin.
· Pipetleme başlığı, tampona yerleştirilen, nokta deliklerinden biraz daha yüksek, pozitif basıncı korur. Pipetin ucu küçük bir deliğe yerleştirilebilir.
· Yavaş ve istikrarlı bir şekilde örnekler. Pipet ucu nokta numune deliğinin üzerine yerleştirilir ve numune deliğe batar. İtmek yerine numune deliğini doldurmak için numune batmasına izin verin.
· Sıvı kafalı son numune damlası, sıvı ikinci bacağa hareket edecek, sıvı hareketini yavaşça yükseltecek, tampondan çıkacak
Dikey tutkal örnekleme nasıl yapılır?
· İki cam parçası arasında oluşan dikey tutkal noktası numune delikleri. Çok ince tutkalda, pipet başlığı iki cam plaka arasına bile yerleştirilemez. Gliserin izleyin! Pipet başlığını numune deliğinin üzerine koyun ve numune deliğe batar.
· Daha önce nokta numunesi, polipropilen asil jel numune deliğinin dikey noktasını temizlediğinizden emin olun. Colimerize edilmemiş akrilamid ve numune deliğinin altında görünebilecek suyu yıkayın. Su, numune deliğini önemli ölçüde daha küçük hale getirebilir. 25 ml veya 50ml şırınga ve 18 gauge iğne kullanın. Elektroforez tamponunu dökün ve numune deliğini dikkatlice yıkayın.
· Örnek deliğini görmek zor olabilir, ancak aynı zamanda geri kalanı kolaydır. Fazla delikler varsa, numune tamponu bromofenol mavisi ile test edilebilir.
Gönderme Zamanı: Mar-31-2023